對於cck8試劑(jì)的使用想必不(bù)少用戶還不(bù)知道如何正確的進(jìn)行操(cāo)作 ，今天小編就告訴大家如何正確的操(cāo)作cck8試劑(jì)吧
cck8試劑(jì)的操(cāo)作說明
cck8試劑(jì)細胞活性檢測(cè)
1. 在(zài)96 孔板中接(jiē)種細胞懸液 (100 ml /孔 )  。將培養板放在(zài)培養箱預(yù)培養 (在(zài)37 ℃，5% CO2的條件下 )向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注(zhù)意(yì)不(bù)要(yào)在(zài)孔中生(shēng)成(chéng)氣(qì)泡 ，它們會(huì)影響 O.D值的讀數(shù)) 將培養板在(zài)培養箱內孵育 1-4小時 。 4. 用酶標儀(yí)測(cè)定在(zài)450 nm處的吸(xī)光度 如果(guǒ)暫時不(bù)測(cè)定O.D值 ，打算以後測(cè)定的話，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或(huò)者1% w/vSDS 溶液，並遮蓋培養板避光保存(cún)在(zài)室(shì)溫條件下。在(zài) 24小時內吸(xī)光度不(bù)會(huì)發生(shēng)變化 。
細胞增殖 -毒性檢測(cè)
1. 在(zài)96 孔板中配制 100 ml的細胞懸液 。將培養板在(zài)培養箱預(yù)培養 24小時 ( 在(zài)37℃， 5% CO2的條件下 )向培養板加入10 ml不(bù)同濃度的待測(cè)物質將培養板在(zài)培養箱孵育一段適當的時間 (例(lì)如: 6,12, 24 或(huò)48小時 )向每孔加入10 ml cck8試劑(jì) 溶液 (注(zhù)意(yì)不(bù)要(yào)在(zài)孔中生(shēng)成(chéng)氣(qì)泡 ，它們會(huì)影響 O.D值的讀數(shù)) 。 5. 將培養板在(zài)培養箱內孵育 1-4小時。 6. 用酶標儀(yí)測(cè)定在(zài)450 nm處的吸(xī)光度。如果(guǒ)暫時不(bù)測(cè)定O.D值，打算以後測(cè)定的話，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或(huò)者1% w/vSDS 溶液 ，並遮蓋培養板避光保存(cún)在(zài)室(shì)溫條件下 。在(zài) 24小時內吸(xī)光度不(bù)會(huì)發生(shēng)變化 。 注(zhù)意(yì)：如果(guǒ)待測(cè)物質有氧化性或(huò)還原(yuán)性的話 ，可在(zài)加 cck8試劑(jì)之(zhī)前(qián)更換(huàn)新鮮培養基，去掉藥物的影響。當然藥物影響比較小的情況(kuàng)可以不(bù)更換(huàn)培養基 ，直接(jiē)扣除(chú)培養基中加入藥物後的空(kōng)白吸(xī)收即可 。
cck8試劑(jì)製作標準(zhǔn)曲線
1. 先(xiān)用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量(liàng)，然後接(jiē)種細胞 。 2. 按比例(lì) ( 例(lì)如：1/2比例(lì) ) 依次用培養基等比稀釋成(chéng)一個細胞濃度梯(tī)度 ，一般要(yào)做 3-5個細胞濃度梯(tī)度 ，每組(zǔ)3-6個復孔。
3. 接(jiē)種後培養2-4 小時使細胞貼壁 ，然後加 cck8試劑(jì)試劑(jì)培養一定時間後測(cè)定 O.D值，製作出一條以細胞數(shù)量(liàng)為橫坐標 (X軸) ，O.D值為縱坐標 (Y軸) 的標準(zhǔn)曲線。根據此標準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細胞數(shù)量(liàng) (使用此標準(zhǔn)曲線的前(qián)提條件是實驗(yàn)的條件要(yào)一致 ，便於確定細胞的接(jiē)種數(shù)量(liàng)以及加入 cck8試劑(jì)後的培養時間) 。
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